摘要：為了進(jìn)一步優(yōu)化法醫(yī)物證檢驗(yàn)工作質(zhì)量與效率，提出合理應(yīng)用DNA鑒定技術(shù)的建議。文章在闡述DNA鑒定技術(shù)概念、法醫(yī)DNA檢驗(yàn)原理的基礎(chǔ)上，較為詳細(xì)的探究DNA技術(shù)在法醫(yī)物證檢驗(yàn)實(shí)踐中的應(yīng)用情況，包括多點(diǎn)位DNA指紋技術(shù)、VNTR-PCR技術(shù)、線(xiàn)粒體DNA分析技術(shù)等，以供同行參考借鑒。

關(guān)鍵詞：法醫(yī)物證檢驗(yàn)；多點(diǎn)位DNA指紋、VNTR-PCR、線(xiàn)粒體；DNA分析

1865年，孟德?tīng)栠z傳規(guī)律的發(fā)現(xiàn)奠定了DNA鑒定工作的理論基礎(chǔ)，而且隨著近代人類(lèi)遺傳學(xué)不斷取得發(fā)展進(jìn)步，陸續(xù)為法醫(yī)物證檢驗(yàn)實(shí)踐活動(dòng)提供了各種技術(shù)方法［1］。DNA鑒定技術(shù)將遺傳學(xué)作為理論基礎(chǔ)，將生物檢材內(nèi)的DNA作為目標(biāo)研究對(duì)象，主要協(xié)助法醫(yī)物證檢驗(yàn)人員解決個(gè)體辨識(shí)與親子鑒定等問(wèn)題，DNA技術(shù)在提升法醫(yī)物證檢驗(yàn)工作效率、結(jié)果精確性方面做出很大貢獻(xiàn)，表現(xiàn)出較高的應(yīng)用價(jià)值。

一、簡(jiǎn)述

DNA技術(shù)DNA是一種經(jīng)典的DNA分析雙螺旋結(jié)構(gòu)，是現(xiàn)代生命科學(xué)中的重要發(fā)現(xiàn)之一，對(duì)分子生物學(xué)的發(fā)展起到了正向促進(jìn)作用，也是當(dāng)下生物學(xué)、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中研究的重點(diǎn)課題之一。既往已經(jīng)有很多實(shí)驗(yàn)證實(shí)，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)有復(fù)制、傳遞遺傳信息的作用，而后有科學(xué)家探明了其內(nèi)包含的信息，可以用其解釋人類(lèi)遺傳物質(zhì)的傳遞方式。在遺傳學(xué)內(nèi)，DNA基因發(fā)生重新排列、突變會(huì)使不同個(gè)體的基因存在一定差異。通常而言，案件在發(fā)生過(guò)程會(huì)出現(xiàn)某些生物檢材，利用DNA技術(shù)檢測(cè)鑒定這些檢材，能夠協(xié)助工作人員盡早確定案發(fā)現(xiàn)場(chǎng)的可疑人員，這表明了DNA鑒定技術(shù)用于案件中能發(fā)揮較大作用，能為案件偵破提供直接證據(jù)［2］。當(dāng)下，在分析DNA技術(shù)的基本概況時(shí)，能夠探明到System可被用于DNASTR基因座系統(tǒng)內(nèi)這一事實(shí)，PentaE、D18SS1、THOI等均是較常用的基因座。以上這些基因座在同個(gè)管子內(nèi)擴(kuò)增，各自不僅具備獨(dú)特的作用，在現(xiàn)實(shí)的DNA鑒定中還能將自身的優(yōu)越性充分發(fā)揮出來(lái)，協(xié)助警方高效率的處理案件。并且近些年社會(huì)中很多普通民事糾紛事件中應(yīng)用DNA進(jìn)行鑒定的情況較多，且這一需求有不斷增長(zhǎng)的趨勢(shì)，故而提升DNA鑒定技術(shù)的精確度與時(shí)效性有很大現(xiàn)實(shí)意義，研發(fā)出很多多基因座的試劑。

二、法醫(yī)DNA檢驗(yàn)的應(yīng)用原理

摘要：隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，專(zhuān)家證據(jù)中的DNA證據(jù)，由于其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，在刑事訴訟過(guò)程中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用，尤其是在糾正刑事錯(cuò)案中的功能更是獨(dú)一無(wú)二。但DNA證據(jù)并非永遠(yuǎn)正確，它也會(huì)受到人為因素的影響而出現(xiàn)差錯(cuò)。為了盡可能避免刑事錯(cuò)案的發(fā)生，我國(guó)應(yīng)建立DNA數(shù)據(jù)庫(kù)并制定規(guī)范的DNA檢測(cè)程序，同時(shí)重視證據(jù)鏈問(wèn)題，加速科學(xué)證據(jù)立法的步伐。

關(guān)鍵詞：DNA證據(jù)刑事訴訟程序刑事錯(cuò)案

刑事錯(cuò)案是一個(gè)沉重的歷史話(huà)題，由于人們認(rèn)識(shí)能力的局限及各種因素的影響，錯(cuò)案在任何一個(gè)時(shí)代、任何一個(gè)社會(huì)都難以避免。隨著科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，物證在刑事訴訟過(guò)程中越來(lái)越占據(jù)重要的地位，DNA證據(jù)則以其獨(dú)特的魅力為控辯雙方所青睞，有關(guān)DNA專(zhuān)家證據(jù)的采納標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題經(jīng)常成為法庭上爭(zhēng)論的焦點(diǎn)，而DNA證據(jù)在糾正刑事錯(cuò)案中的作用也是其他證據(jù)所無(wú)可比擬的。

一、DNA證據(jù)的特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)

DNA檢測(cè)作為一種特殊的證據(jù)，與其他證據(jù)相比，具有獨(dú)特的證據(jù)價(jià)值。該證據(jù)的特點(diǎn)主要表現(xiàn)在：一是DNA證據(jù)的準(zhǔn)確率高。根據(jù)科學(xué)家們的研究結(jié)果，如果用33.15DNA探針，兩個(gè)無(wú)關(guān)個(gè)體之間相同的機(jī)會(huì)小于3000億分之一，即便是同胞兄弟姐妹之間，完全相同的概率也只有200萬(wàn)分之一；如果用33.15和33.6兩個(gè)探針，無(wú)關(guān)個(gè)體之間的相同機(jī)會(huì)就更小；二是DNA證據(jù)的穩(wěn)定性強(qiáng)。刑事案件的絕大多數(shù)證據(jù)都會(huì)隨著時(shí)間的推移而消失，或者受天氣、溫度等環(huán)境條件的變化而失去原有的價(jià)值。與之相比，DNA證據(jù)則不會(huì)受上述條件的影響，即便是埋葬在地下多年的白骨，也能通過(guò)DNA檢測(cè)確定死者的身份；三是DNA證據(jù)具有客觀性，不受作證者主觀意念的影響。DNA檢測(cè)結(jié)果是否與案件事實(shí)有關(guān)，是以科學(xué)的結(jié)論為依據(jù)的，無(wú)論操作者是誰(shuí)，只要遵循科學(xué)的檢測(cè)程序，其結(jié)果都是一樣的；四是DNA檢測(cè)時(shí)間短、識(shí)別率高，且所需檢材少，特別適合刑事案件的偵查工作。

DNA證據(jù)的特點(diǎn)也就是其優(yōu)勢(shì)所在。除了上述幾個(gè)方面的優(yōu)勢(shì)外，DNA證據(jù)還有一大優(yōu)勢(shì)，就是其保存時(shí)間長(zhǎng)，可達(dá)數(shù)年之久，并能經(jīng)受一定程度的污染。而傳統(tǒng)的血液檢測(cè)結(jié)果保存時(shí)間最長(zhǎng)不超過(guò)一個(gè)月，經(jīng)典的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)也容易被化學(xué)物品、微生物等污染而迅速變質(zhì)。

【摘要】目的研究HBV血清學(xué)標(biāo)志物(兩對(duì)半)和HBVDNA兩者之間的相關(guān)性，為確定乙肝檢測(cè)項(xiàng)目提供科學(xué)依據(jù)。方法采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)健康體檢者HBV血清學(xué)標(biāo)志物，核酸擴(kuò)增熒光定量檢測(cè)法檢測(cè)HBVDNA，并采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果476例HBsAg陽(yáng)性血清中，HBVDNA陽(yáng)性321例，陽(yáng)性率67.44%;乙肝大三陽(yáng)HBVDNA陽(yáng)性率92.17%，小三陽(yáng)HBVDNA陽(yáng)性率為61.00%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);HBeAg陽(yáng)性標(biāo)本中HBVDNA陽(yáng)性率為92.17%，HbeAg陽(yáng)性標(biāo)本中HBVDNA陽(yáng)性率為67.44%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論HBV血清學(xué)標(biāo)志物和HBVDNA二者之間互有聯(lián)系但又有所不同，不能只以HbeAg的檢測(cè)結(jié)果作為判斷HBV傳染性和復(fù)制的指標(biāo)，而應(yīng)選擇檢測(cè)HBVDNA作為補(bǔ)充。

【關(guān)鍵詞】乙肝兩對(duì)半;乙肝病毒DNA;陽(yáng)性率

據(jù)估計(jì)，全世界現(xiàn)有乙肝病毒攜帶者3.6億，其中我國(guó)約有1.3億。乙型肝炎的流行不僅影響整個(gè)民族的健康素質(zhì)，也給社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，已成為我國(guó)目前最為突出的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。目前診斷乙型肝炎最常用的指標(biāo)是檢測(cè)乙肝病毒(HBV)血清學(xué)標(biāo)志物(即兩對(duì)半)。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)HBV血清學(xué)標(biāo)志物只能反映人體對(duì)HBV的免疫反應(yīng)狀態(tài)，不能直接反映HBV在患者體內(nèi)的復(fù)制情況，也不能作為判斷患者是否具有傳染性的直接證據(jù)[1]。而HBVDNA含量是判斷病毒復(fù)制活躍和具有傳染性的直接和可靠的依據(jù)，定量檢測(cè)HBVDNA是衡量乙肝傳染性的最精確的指標(biāo)，是確定HBV感染不同復(fù)制狀態(tài)的有效檢測(cè)手段[2]。為了進(jìn)一步研究HBV血清學(xué)標(biāo)志物和HBVDNA兩者之間的相關(guān)性，我們對(duì)2005至2008年來(lái)吉林省吉林中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院做健康檢查的3415名正常健康者進(jìn)行HBV血清學(xué)標(biāo)志物和HBVDNA檢測(cè)，現(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果分析如下下載論文。

1基本情況

1.1標(biāo)本來(lái)源

2005至2008年吉林省吉林中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院3415名健康體檢者血清中HBV血清學(xué)標(biāo)志物陽(yáng)性512份。

摘要：隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，專(zhuān)家證據(jù)中的DNA證據(jù)，由于其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，在刑事訴訟過(guò)程中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用，尤其是在糾正刑事錯(cuò)案中的功能更是獨(dú)一無(wú)二。但DNA證據(jù)并非永遠(yuǎn)正確，它也會(huì)受到人為因素的影響而出現(xiàn)差錯(cuò)。為了盡可能避免刑事錯(cuò)案的發(fā)生，我國(guó)應(yīng)建立DNA數(shù)據(jù)庫(kù)并制定規(guī)范的DNA檢測(cè)程序，同時(shí)重視證據(jù)鏈問(wèn)題，加速科學(xué)證據(jù)立法的步伐。

關(guān)鍵詞：DNA證據(jù)刑事訴訟程序刑事錯(cuò)案

刑事錯(cuò)案是一個(gè)沉重的歷史話(huà)題，由于人們認(rèn)識(shí)能力的局限及各種因素的影響，錯(cuò)案在任何一個(gè)時(shí)代、任何一個(gè)社會(huì)都難以避免。隨著科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，物證在刑事訴訟過(guò)程中越來(lái)越占據(jù)重要的地位，DNA證據(jù)則以其獨(dú)特的魅力為控辯雙方所青睞，有關(guān)DNA專(zhuān)家證據(jù)的采納標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題經(jīng)常成為法庭上爭(zhēng)論的焦點(diǎn)，而DNA證據(jù)在糾正刑事錯(cuò)案中的作用也是其他證據(jù)所無(wú)可比擬的。

一、DNA證據(jù)的特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)

DNA檢測(cè)作為一種特殊的證據(jù)，與其他證據(jù)相比，具有獨(dú)特的證據(jù)價(jià)值。該證據(jù)的特點(diǎn)主要表現(xiàn)在：一是DNA證據(jù)的準(zhǔn)確率高。根據(jù)科學(xué)家們的研究結(jié)果，如果用33.15DNA探針，兩個(gè)無(wú)關(guān)個(gè)體之間相同的機(jī)會(huì)小于3000億分之一，即便是同胞兄弟姐妹之間，完全相同的概率也只有200萬(wàn)分之一；如果用33.15和33.6兩個(gè)探針，無(wú)關(guān)個(gè)體之間的相同機(jī)會(huì)就更小；二是DNA證據(jù)的穩(wěn)定性強(qiáng)。刑事案件的絕大多數(shù)證據(jù)都會(huì)隨著時(shí)間的推移而消失，或者受天氣、溫度等環(huán)境條件的變化而失去原有的價(jià)值。與之相比，DNA證據(jù)則不會(huì)受上述條件的影響，即便是埋葬在地下多年的白骨，也能通過(guò)DNA檢測(cè)確定死者的身份；三是DNA證據(jù)具有客觀性，不受作證者主觀意念的影響。DNA檢測(cè)結(jié)果是否與案件事實(shí)有關(guān)，是以科學(xué)的結(jié)論為依據(jù)的，無(wú)論操作者是誰(shuí)，只要遵循科學(xué)的檢測(cè)程序，其結(jié)果都是一樣的；四是DNA檢測(cè)時(shí)間短、識(shí)別率高，且所需檢材少，特別適合刑事案件的偵查工作。

DNA證據(jù)的特點(diǎn)也就是其優(yōu)勢(shì)所在。除了上述幾個(gè)方面的優(yōu)勢(shì)外，DNA證據(jù)還有一大優(yōu)勢(shì)，就是其保存時(shí)間長(zhǎng)，可達(dá)數(shù)年之久，并能經(jīng)受一定程度的污染。而傳統(tǒng)的血液檢測(cè)結(jié)果保存時(shí)間最長(zhǎng)不超過(guò)一個(gè)月，經(jīng)典的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)也容易被化學(xué)物品、微生物等污染而迅速變質(zhì)。

內(nèi)容摘要：將生物學(xué)領(lǐng)域的遺傳基因DNA與工業(yè)設(shè)計(jì)理論相結(jié)合，借鑒生物基因工程原理，探索工業(yè)設(shè)計(jì)中產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA的基本理論。討論了產(chǎn)品族以及產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA的概念，分析了產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA在產(chǎn)業(yè)界和學(xué)術(shù)界的應(yīng)用研究，探討了產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA的內(nèi)涵以及研究?jī)?nèi)容，指出了產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA的發(fā)展趨勢(shì)。

隨著技術(shù)的同質(zhì)化，產(chǎn)品不再只滿(mǎn)足于功能性的要求，如何賦予產(chǎn)品特殊的形態(tài)與風(fēng)格意象以塑造獨(dú)特的品牌，已經(jīng)成為產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的重要工作之

一。在那些著名企業(yè)，產(chǎn)品的風(fēng)格總是在不斷創(chuàng)新中保持一定的繼承性，如奔馳、寶馬、諾基亞，無(wú)論旗下的產(chǎn)品經(jīng)過(guò)多少更新?lián)Q代，人們總能將它們從眾多品牌的產(chǎn)品中識(shí)別出來(lái)。然而，產(chǎn)品設(shè)計(jì)充滿(mǎn)了模糊性與不確定性，很難以傳統(tǒng)的手段解構(gòu)其造型法則，一般都是設(shè)計(jì)師憑借自身的經(jīng)驗(yàn)與靈感，將設(shè)計(jì)意圖映射到新設(shè)計(jì)當(dāng)中。由于缺乏理性的支持，難以形成一套切實(shí)可行的風(fēng)格導(dǎo)向的產(chǎn)品設(shè)計(jì)方法。

一、產(chǎn)品族以及產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA的概念

1.產(chǎn)品族的概念

產(chǎn)品族(ProductFamily)是指以產(chǎn)品平臺(tái)為基礎(chǔ)，通過(guò)共享通用技術(shù)并定位于一系列相關(guān)聯(lián)的市場(chǎng)應(yīng)用的一組產(chǎn)品，它是一種利用有限的開(kāi)發(fā)、制造和服務(wù)來(lái)經(jīng)濟(jì)地發(fā)展產(chǎn)品多樣性的方法。

DNA指紋技術(shù)，是英國(guó)萊斯特大學(xué)教授杰弗里斯于1985年發(fā)明的.由于它可以解決法醫(yī)技術(shù)領(lǐng)域同一認(rèn)定的問(wèn)題，因此引起了世界各國(guó)警察、司法部門(mén)的極大重視。目前，英、美、西德、日、意等比較先進(jìn)的國(guó)家對(duì)DNA的研究己達(dá)到了相當(dāng)?shù)乃?，“并已將其?yīng)用到許多實(shí)際案例中，其準(zhǔn)確無(wú)誤的鑒定結(jié)果證明，它大大地提高了生物物證應(yīng)有的價(jià)值。”因此，它被稱(chēng)為“90年代打擊犯罪的利器?！?/p>

1、DNA指紋技術(shù)

每個(gè)人身上(包括動(dòng)植物個(gè)體)都擁有一套獨(dú)一無(wú)二的遺傳密碼，這些密碼記錄著人體成長(zhǎng)的所有訊息，除了極少數(shù)(如紅血球)外，幾乎人身上的每一個(gè)細(xì)胞都含有這套完整的遺傳密碼。這些密碼存在于細(xì)胞里的細(xì)胞核內(nèi)，其中23對(duì)染色體就是用來(lái)儲(chǔ)存這些密碼的，而這些密碼就是由DNA分子所組成。DNA本身則是由四個(gè)氮堿基質(zhì)(代碼為A、G、T和C)以磷酸雙醋鍵結(jié)合而成，這個(gè)氮堿以長(zhǎng)鏈狀結(jié)構(gòu)排列形成染色體，其基本結(jié)構(gòu)形如(圖l)

雙股螺旋形的DNA，其氮基質(zhì)AT、GC相互成對(duì)，且兩股間的A與T、G與C相互對(duì)應(yīng)互補(bǔ)產(chǎn)生了DNA的重要特性。同時(shí)AGTC四個(gè)氮堿在整條DNA(的)鏈中的重復(fù)排列形成了DNA序列。就人類(lèi)而言，每一個(gè)細(xì)胞里大約有30億個(gè)A一T或G一C相互排列的氮堿對(duì)，組成人類(lèi)的基因組，這些組合在人體形成到生長(zhǎng)過(guò)中永遠(yuǎn)存在。并且在龐大的DNA序列，它的排列也是有規(guī)律的。依目前的技手段來(lái)說(shuō)，使用多基因位探子鑒定，可到一百萬(wàn)億分之一的準(zhǔn)確率，也就說(shuō)在過(guò)一百萬(wàn)億的人口中才有可能遇到兩個(gè)NA指紋相同的人。但這個(gè)數(shù)字己遠(yuǎn)遠(yuǎn)過(guò)了整個(gè)世界人口。其特定性非?？?，不用懷疑。正因?yàn)榭茖W(xué)家們從人體身攜帶的遺傳密碼DNA(去氧核糖核)中成功地證明了其與手紋同樣具有“人各不同”的特定性，才共同將DNA之為“DNA指紋?！?/p>

2、DNA指紋的利用

DNA指紋不僅具有取代手指指紋作人別鑒定依據(jù)的潛力，而且在打擊犯罪面，也具有更大的優(yōu)越性。由于DNA指紋轉(zhuǎn)換成數(shù)字儲(chǔ)存在電腦中比指紋的儲(chǔ)存更為方便，可大量地節(jié)省記憶的空間，增加儲(chǔ)存量，縮短查尋比對(duì)時(shí)間。因此，如果能用電腦來(lái)處理DNA指紋檔案，即使是對(duì)毫無(wú)線(xiàn)索的刑事案件，只要在犯罪現(xiàn)場(chǎng)找到兇手所遺留的任何生物物證，而鑒定其DNA指紋，即可迅速地在電腦檔案中找出罪犯，對(duì)目前警方制止和打擊犯罪的能力將大大地提高。況且，手指可能因受傷或被砍斷而失去指紋，但DNA指紋卻存在于身上每一個(gè)角落，就是飛機(jī)爆炸僅剩下人身上的一塊肉，或是殺人焚尸只剩下一塊白骨，DNA指紋仍然存在。

內(nèi)容摘要：將生物學(xué)領(lǐng)域的遺傳基因DNA與工業(yè)設(shè)計(jì)理論相結(jié)合，借鑒生物基因工程原理，探索工業(yè)設(shè)計(jì)中產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA的基本理論。討論了產(chǎn)品族以及產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA的概念，分析了產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA在產(chǎn)業(yè)界和學(xué)術(shù)界的應(yīng)用研究，探討了產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA的內(nèi)涵以及研究?jī)?nèi)容，指出了產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA的發(fā)展趨勢(shì)。

關(guān)鍵詞：產(chǎn)品設(shè)計(jì)，產(chǎn)品族，DNA，知識(shí)

隨著技術(shù)的同質(zhì)化，產(chǎn)品不再只滿(mǎn)足于功能性的要求，如何賦予產(chǎn)品特殊的形態(tài)與風(fēng)格意象以塑造獨(dú)特的品牌，已經(jīng)成為產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的重要工作之一。在那些著名企業(yè)，產(chǎn)品的風(fēng)格總是在不斷創(chuàng)新中保持一定的繼承性，如奔馳、寶馬、諾基亞，無(wú)論旗下的產(chǎn)品經(jīng)過(guò)多少更新?lián)Q代，人們總能將它們從眾多品牌的產(chǎn)品中識(shí)別出來(lái)。然而，產(chǎn)品設(shè)計(jì)充滿(mǎn)了模糊性與不確定性，很難以傳統(tǒng)的手段解構(gòu)其造型法則，一般都是設(shè)計(jì)師憑借自身的經(jīng)驗(yàn)與靈感，將設(shè)計(jì)意圖映射到新設(shè)計(jì)當(dāng)中。由于缺乏理性的支持，難以形成一套切實(shí)可行的風(fēng)格導(dǎo)向的產(chǎn)品設(shè)計(jì)方法。

一、產(chǎn)品族以及產(chǎn)品族設(shè)計(jì)DNA的概念

1.產(chǎn)品族的概念

產(chǎn)品族(ProductFamily)是指以產(chǎn)品平臺(tái)為基礎(chǔ)，通過(guò)共享通用技術(shù)并定位于一系列相關(guān)聯(lián)的市場(chǎng)應(yīng)用的一組產(chǎn)品，它是一種利用有限的開(kāi)發(fā)、制造和服務(wù)來(lái)經(jīng)濟(jì)地發(fā)展產(chǎn)品多樣性的方法。

論文關(guān)鍵詞：前S2抗原；HBV-DNA；乙型肝炎病毒標(biāo)志物

論文摘要：目的：探討乙肝病毒前S2抗原(pre-S2Ag)的檢測(cè)及其臨床意義。方法：對(duì)188例標(biāo)本采用ELISA法進(jìn)行乙型肝炎病毒標(biāo)志物fHBVM1及pre-S2Ag檢測(cè)，并對(duì)其中162例標(biāo)本應(yīng)用熒光定量PCR法檢測(cè)HBV-DNA。結(jié)果：162例血清標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)HBV-DNA和pre-S2Ag，兩者檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=2.78，P＞0.05)。HBeAg(+)與HBeAb(+)組之間pre-S2Ag陽(yáng)性率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=28.03，P＜0.005)。HBeAg(+)組、HBclgM(+)組pre-S2Ag陽(yáng)性率為100％，HBSAg(+)的肝癌組pre-S2Ag陽(yáng)性率達(dá)95.0％，結(jié)果明顯高于HBV-DNA(-)組18.4％，P值均＜0.005。結(jié)論：pre-S2Ag是反映病毒感染與復(fù)制的指標(biāo)，與臨床病情活動(dòng)有關(guān)，可作為療效和預(yù)后的觀察指標(biāo)，能完善和補(bǔ)充乙肝病毒血清標(biāo)志物的檢測(cè)。

我國(guó)是乙型肝炎病毒(HepatitiSBViruS,HBV)感染的流行區(qū)，乙型肝炎病毒是引起病毒性肝炎最常見(jiàn)的溶血性病毒，不僅人群感染率高。而且有些HBV感染可能由于外周耐受，T細(xì)胞反應(yīng)低下、抗原呈遞抑制、選擇性免疫抑制、病毒基因表達(dá)下調(diào)或基因變異等導(dǎo)致T細(xì)胞識(shí)別障礙，容易轉(zhuǎn)為慢性感染。部分患者可演變?yōu)楦斡不踔猎l(fā)性肝癌。不同的HBV血清免疫標(biāo)志物模式提示不同的臨床意義，HBV-DNA是判定HBV感染者病毒是否復(fù)制和當(dāng)前有無(wú)傳染性的主要指標(biāo)，了解免疫學(xué)和分子生物學(xué)標(biāo)志物間的關(guān)系對(duì)臨床診斷和治療很有價(jià)值。據(jù)估計(jì)無(wú)癥狀的乙肝病毒攜帶者達(dá)1.2億，乙肝患者3000多萬(wàn)，其中15％～25％的患者將死于慢性肝病(肝癌、肝硬化)，給人類(lèi)健康帶來(lái)極大危害。為了能及時(shí)、準(zhǔn)確地診斷，以指導(dǎo)治療及判斷預(yù)后，乙肝病毒的檢測(cè)指標(biāo)日益增多。文獻(xiàn)資料顯示，pre-S2Ag在乙肝HBSAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)模式中陽(yáng)性檢出率最高，抗HBSAg(+)、抗HBe(+)、抗HBe+模式中次之，其他模式較低。本文就pre-S2Ag陽(yáng)性率與HBV-DNA、HBVM檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較分析，旨在探討pre-S2Ag檢測(cè)的臨床意義，現(xiàn)總結(jié)分析報(bào)道如下：

1．資料與方法

1．1標(biāo)本來(lái)源

搜集本院2006年3～12月門(mén)診和入院患者188例，其中同時(shí)檢測(cè)HBVM及HBV-DNA共162例：另外急性乙肝患者6例，乙肝表面抗原陽(yáng)性并臨床診斷為肝癌患者20例。

摘要：為了使教學(xué)工作緊跟科學(xué)發(fā)展前沿與熱點(diǎn)，該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)引入DNA損傷修復(fù)內(nèi)容，并使所提出的問(wèn)題均具有開(kāi)放性，旨在全方位鍛煉學(xué)生的自主性與創(chuàng)新性，提高細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)效果。

關(guān)鍵詞：研究熱點(diǎn)；學(xué)科問(wèn)題；DNA損傷修復(fù)；創(chuàng)新性；自主性

實(shí)驗(yàn)教學(xué)是細(xì)胞生物學(xué)課程體系的重要組成部分，是對(duì)細(xì)胞生物學(xué)理論課程的重要支撐，有助于學(xué)生掌握理論基礎(chǔ)知識(shí)，訓(xùn)練探索科學(xué)的方法，激發(fā)學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)手腦并用能力及實(shí)事求是的科學(xué)作風(fēng)和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度。因此，不斷改進(jìn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法和教學(xué)內(nèi)容，是相關(guān)課程實(shí)驗(yàn)教學(xué)教師應(yīng)長(zhǎng)期關(guān)注和探討的課題。進(jìn)入21世紀(jì)以來(lái)，生命科學(xué)取得了巨大進(jìn)步和迅速發(fā)展，已經(jīng)成為自然科學(xué)的前沿學(xué)科。大量研究成果的出現(xiàn)及相關(guān)知識(shí)和信息的井噴式增長(zhǎng)，不斷地革新著我們對(duì)生命的理解和認(rèn)識(shí)[1-4]。這些不斷出現(xiàn)的新成果和新知識(shí)，不僅為生物學(xué)教學(xué)工作注入源源不斷的素材，也是對(duì)教學(xué)工作者的挑戰(zhàn)，只有及時(shí)更新和完善教學(xué)內(nèi)容和教學(xué)方法，才能使教學(xué)工作跟上生命科學(xué)發(fā)展的步伐[5-7]。為了跟蹤生命科學(xué)研究前沿，將當(dāng)前生命科學(xué)研究熱點(diǎn)引入課堂，將大大提升學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性。筆者在細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容中引入“DNA損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)”，取得了良好的教學(xué)成果。

1將科學(xué)研究熱點(diǎn)與一流教學(xué)平臺(tái)結(jié)合

DNA損傷修復(fù)是細(xì)胞內(nèi)DNA分子在受到外源或內(nèi)源損傷后，在多種蛋白共同作用下自我修復(fù)從而恢復(fù)結(jié)構(gòu)的過(guò)程。DNA損傷修復(fù)研究對(duì)研究基因組不穩(wěn)定性及腫瘤的發(fā)生與發(fā)展具有重要的指導(dǎo)意義，其中關(guān)鍵信號(hào)分子的靶向小分子藥物研究，對(duì)于腫瘤治療具有極其重要的臨床意義。例如，在臨床中運(yùn)用PARP1抑制劑來(lái)抑制PARP1介導(dǎo)的DNA修復(fù)，對(duì)于腫瘤尤其是BRCA1/2基因突變引起的腫瘤，具有極好的治療效果，已在臨床上廣泛使用[8-9]。由于DNA損傷修復(fù)研究在腫瘤研究和腫瘤治療過(guò)程中具有重要作用，已成為各國(guó)重點(diǎn)投入的熱點(diǎn)研究學(xué)科。2015年度諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予托馬斯•林道爾（TomasLindahl）、保羅•莫德里奇（PaulModrich）和阿奇茲•?？ǎˋzizSancar），就是表彰他們?cè)贒NA修復(fù)機(jī)制方面的研究貢獻(xiàn)。將DNA損傷修復(fù)研究引入細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)，能夠使學(xué)生切身體會(huì)和感受生命科學(xué)研究的前沿科學(xué)問(wèn)題，激發(fā)他們探究生命奧秘的信心。我校生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心是我國(guó)首批建設(shè)的國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，擁有一流的實(shí)驗(yàn)教學(xué)設(shè)備和實(shí)驗(yàn)教學(xué)隊(duì)伍。在多年的教學(xué)過(guò)程中，中心改變了實(shí)驗(yàn)教學(xué)依附于理論課教學(xué)的模式，全面整合教學(xué)內(nèi)容，強(qiáng)化基本實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練，以能力培養(yǎng)為主線(xiàn)，重點(diǎn)培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)研究能力和科學(xué)思維能力，以及良好的科學(xué)研究素養(yǎng)。中心目前已建成多個(gè)綜合型實(shí)驗(yàn)教學(xué)實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)設(shè)備先進(jìn)、功能齊全，除了完成基本教學(xué)任務(wù)外，已經(jīng)具備供學(xué)生進(jìn)行系統(tǒng)性科學(xué)實(shí)驗(yàn)探索的能力，是本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革工作的堅(jiān)實(shí)保障。

2教學(xué)改革目標(biāo)

1腫瘤特異性免疫機(jī)制及腫瘤的免疫逃逸機(jī)制腫瘤在機(jī)體內(nèi)能引發(fā)體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答，而以后者為主.腫瘤抗原在細(xì)胞內(nèi)加工成肽段后與細(xì)胞表面的主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ(majorhistocompatibilitycomplex,MHCⅠ)類(lèi)分子結(jié)合并呈遞給CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，或先從腫瘤細(xì)胞上脫落，再由抗原提呈細(xì)胞攝取、加工成肽段后與表面MHCⅡ類(lèi)分子結(jié)合并呈遞給CD4+輔助性T淋巴細(xì)胞，進(jìn)而誘發(fā)機(jī)體的抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答.值得注意的是CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞的激活都需要MHC抗原肽復(fù)合物和免疫共刺激分子的協(xié)同刺激作用［1］，而共刺激分子的缺失正是腫瘤引發(fā)的機(jī)體外周免疫耐受的可能機(jī)制之一.腫瘤由于其極大的異質(zhì)性和遺傳不穩(wěn)定性，在機(jī)體環(huán)境長(zhǎng)時(shí)間的免疫選擇壓力下，會(huì)啟動(dòng)一系列的免疫逃避機(jī)制，對(duì)抗機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng).這些機(jī)制分別針對(duì)T細(xì)胞對(duì)腫瘤的識(shí)別階段和效應(yīng)階段，包括腫瘤抗原的丟失、MHCⅠ類(lèi)分子表達(dá)下調(diào)、抗原加工缺陷、表達(dá)干擾細(xì)胞毒作用的蛋白酶及表達(dá)FasL等［2］.

2腫瘤疫苗的設(shè)計(jì)策略

2.1總體思路針對(duì)腫瘤抗原在機(jī)體內(nèi)免疫原性下降，造成特異性細(xì)胞免疫激活不足，外周免疫耐受的狀況，腫瘤疫苗設(shè)計(jì)策略的總體思路是應(yīng)用各種技術(shù)，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤抗原的識(shí)別能力，改善免疫微環(huán)境，引發(fā)有力的特異性抗腫瘤細(xì)胞免疫，阻止腫瘤進(jìn)展，最終消除腫瘤.

2.2腫瘤細(xì)胞疫苗腫瘤細(xì)胞疫苗是將整個(gè)腫瘤細(xì)胞作為抗原導(dǎo)入患者體內(nèi)，誘導(dǎo)特異性的抗腫瘤免疫應(yīng)答.由于腫瘤細(xì)胞帶有腫瘤的全部抗原，無(wú)需考慮分離腫瘤特異性抗原（tumorspecificantigen,TSA），而且由于自體腫瘤細(xì)胞具有和正常組織相同的人類(lèi)白細(xì)胞抗原，不會(huì)引發(fā)機(jī)體的免疫排斥反應(yīng)，因此被認(rèn)為是理想的腫瘤疫苗方案.但是自體腫瘤組織來(lái)源十分有限，并且考慮到TSA的表達(dá)具有一定的組織特異性，因此這種方法的應(yīng)用受到了限制［3］.后來(lái)，人們開(kāi)始使用人工培養(yǎng)的同種異體腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行腫瘤疫苗的研究.不同腫瘤細(xì)胞的混合能夠提供一系列的TSA，有利于增加腫瘤疫苗的免疫原性，減小其發(fā)生抗原丟失的幾率［2］.但是，單獨(dú)使用自體或異體的腫瘤細(xì)胞難以產(chǎn)生足夠強(qiáng)度的免疫應(yīng)答，免疫佐劑的使用極大地改善了這種情況.隨著基因工程的進(jìn)展，人們開(kāi)始對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行基因修飾，將編碼免疫共刺激分子如CD80，CD86的基因，導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞中，為T(mén)細(xì)胞活化提供第二信號(hào)，有效地打破了腫瘤的外周免疫耐受.近年來(lái)，也有人將編碼一些細(xì)胞因子如IL2，IL12，粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocytcmacrohagecolonystimulatihyfactor,GMCSF）等的基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，期望通過(guò)細(xì)胞因子蛋白的表達(dá)，改善腫瘤組織局部免疫微環(huán)境，增強(qiáng)T細(xì)胞的抗腫瘤免疫效應(yīng)［4］.然而，近些年來(lái)臨床實(shí)驗(yàn)表明，即使在實(shí)驗(yàn)中能夠誘發(fā)滿(mǎn)意免疫反應(yīng)的腫瘤細(xì)胞疫苗，在轉(zhuǎn)化成臨床有效的治療性腫瘤疫苗時(shí)都遇到了困難.Fifis等［5］的研究發(fā)現(xiàn)，大鼠結(jié)腸癌細(xì)胞系經(jīng)體外培養(yǎng)后免疫同源小鼠，引發(fā)了免疫反應(yīng)和腫瘤保護(hù)效應(yīng).然而，當(dāng)他們對(duì)荷瘤小鼠進(jìn)行同樣處理時(shí)，卻大大促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)，提示腫瘤細(xì)胞能夠通過(guò)一系列機(jī)制抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，包括分泌免疫抑制因子IL10，腫瘤生長(zhǎng)因子β阻止有效的免疫反應(yīng)；分泌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，GMCSF等因子活化具有免疫抑制作用的骨髓源性細(xì)胞；激活特異的調(diào)節(jié)性CD4+CD25+T細(xì)胞以下調(diào)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的效應(yīng)等.

2.3腫瘤抗原疫苗腫瘤能夠引起機(jī)體特異性免疫反應(yīng)的現(xiàn)象引發(fā)了對(duì)腫瘤抗原的研究.腫瘤抗原包括多個(gè)層次：完整的蛋白質(zhì)分子、抗原肽及純化的DNA.關(guān)于腫瘤DNA疫苗，下文將另行討論.目前將腫瘤抗原分為T(mén)SA和腫瘤相關(guān)抗原（tumorassociated,TAA）.TSA是指只存在于腫瘤細(xì)胞，而TAA并非腫瘤細(xì)胞特有的抗原，只是在發(fā)生腫瘤時(shí)此類(lèi)抗原的表達(dá)明顯上調(diào).Tabi等［2］認(rèn)為，腫瘤抗原必須在全部或大多數(shù)患有相同腫瘤患者的大部分腫瘤細(xì)胞中呈普遍的高表達(dá)狀態(tài).他將腫瘤抗原分為5類(lèi)：①突變抗原；②腫瘤細(xì)胞過(guò)度表達(dá)抗原；③癌睪抗原;④組織特異性分化抗原；⑤病毒抗原.

單獨(dú)應(yīng)用腫瘤抗原蛋白存在免疫原性差的問(wèn)題，這是由于腫瘤細(xì)胞可通過(guò)抗原、HLA缺失等機(jī)制發(fā)生逃逸.劉宏利等［6］結(jié)合了肽疫苗和DNA疫苗各自的特點(diǎn)，以P815腫瘤細(xì)胞的CTL表位（P815A3543）為模型，合成該表位加多聚賴(lài)氨酸的顆粒性多肽，并制備含有編碼此表位和GMCSF基因的表達(dá)質(zhì)粒，制成了新型的顆粒性肽DNA復(fù)合疫苗，這種疫苗利于APC的攝取加工，可誘導(dǎo)有效的CTL應(yīng)答，從而預(yù)防小鼠致命性P815腫瘤細(xì)胞攻擊，并可部分根除腫瘤.